دقت کنید که پرمیژن های هم دایروکتری و هم فایل ها رو درست ست کرده باشی.
اگر مشکل حل نشد، یه نگاهی به لاگ iis بندازید، آدرس فایل لاگ رو برات مینویسم
%SYSTEMROOT%\System32\LogFiles\W3SVC###\*.log
تو لاگ دنبال خطای 401 بگرد، تو همون سطر بعد از عدد 401 یه عدد دوم نوشته شده، که در حقیقت کد ثانویه خطای 401 هست، با دونستن اون به صورت دقیق میشه گفت مشکل از کجاست.
یه راه آسونتر و بهتر هم اینه که Show Friendly HTTP Errors رو تو مرورگرت غیر فعال کنی تا کد خطای ثانویه رو ببینی.